PEI轉(zhuǎn)染試劑其原理是帶正電的陽離子聚合物與核酸中帶負(fù)電的磷酸基團形成帶正電的復(fù)合物后,再與細胞表面帶負(fù)電的蛋白多糖相互作用,通過細胞胞吞進入細胞。該產(chǎn)品具有轉(zhuǎn)染效率高,細胞毒性低,操作簡單,重復(fù)性好,適用范圍廣等特點。
1、接種細胞:
對于貼壁細胞,轉(zhuǎn)染前18-24 h進行鋪板(不含抗生素),使其在轉(zhuǎn)染時的密度大約在80%左右。對于懸浮細胞,轉(zhuǎn)染當(dāng)天,配制EZ Trans-DNA復(fù)合物之前進行鋪板,每500 µL生長培養(yǎng)基中加入4~8×105cells。
2、準(zhǔn)備EZ Trans-DNA復(fù)合物:
a、對于每孔細胞,將1 μg質(zhì)粒DNA稀釋到40 μL無血清的高糖DMEM培養(yǎng)基(或者OPTI-MEMⅠ培養(yǎng)基),混勻。
b、對于每孔細胞,將3 μL EZ Trans轉(zhuǎn)染試劑稀釋到40 μL無血清的高糖DMEM培養(yǎng)基(或者OPTI-MEMⅠ培養(yǎng)基),輕輕混勻。
注:無血清的高糖DMEM培養(yǎng)基是稀釋液,不能使用含血清的培養(yǎng)基進行DNA和EZ Trans轉(zhuǎn)染試劑的稀釋。因為EZ Trans-DNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物的形成過程不能含有血清。
c、將稀釋好的EZ Trans轉(zhuǎn)染試劑盡快全部加入到已稀釋好的質(zhì)粒DNA中,輕輕混勻。
d、室溫放置10-15 min,以形成EZ Trans-DNA復(fù)合物。
3、轉(zhuǎn)染細胞:
a、將上述80 μL EZ Trans-DNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物均勻滴入到含細胞的培養(yǎng)皿中。輕輕晃動培養(yǎng)皿或輕微振蕩,讓EZ Trans-DNA復(fù)合物分散均勻。
b、在37℃,5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)6-18 h,去除含EZ Trans-DNA復(fù)合物的培養(yǎng)液,更換新的培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)至對轉(zhuǎn)入基因表達分析。